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中图分类号:X703 文献标识码:A 文章编号:1009-2455(200)06-0032-03
7 M9 Q- U. z, B# `2 i- V2 a& uAn Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, X......0 Q' j& X& b! N8 y1 x
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中图分类号:X703 文献标识码:A 文章编号:1009-2455(200)06-0032-03& D P" l) [% V1 L$ ]4 i
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, Xuzhou 221008, China) 9 U; U, X3 `. Q0 G( u
Abstract: Two strains of high-effective, lubricating oil degrading bacteria, ZL1 and ZL2, were screened out from oil-contaminated soil, which were preliminarily identified as flavobacteriun and tnicrococcus. The effects of temperature, oil content and pH value on their oil-degrading capacities were dletermined by orthogonal experiment of growth conditions. A degrading capacity experiment was carried out with an initial wastewater oil content of 270 mg/L. The experimental results showed that the oil removal rates by the strains ZL1 and ZL2 from the in-oculum in about 2 days were up to 67. 9% and 76. 2% respectively and the adaptation range of strain ZL2 to oil content and pH value was wider than that of ZL1. Key Words: lubricating oil; oil-containing wastewater; wastewater treatment; microorganism; flavobacteri-un; micrococcus
) _% `$ P, s* |, Z 近年来,国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道,却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法,以市售机油为唯一碳源,从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株,并对其生长条件及降解特性进行研究,以期进一步应用于含油污水的治理。 $ @4 Z# \% x; s" l
1 材料与方法 6 W% z' X7 r9 Z0 V
1.1 土壤样品 某石油库贮油罐附近的石油污染土壤,取样3份,按含油量由多至少编为1#,2#,3#。1.2 培养基 本试验选取两种无机基础培养基,(用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌),编号分别为1#,2#,组成如下: 1#基础培养基:p(KH2PO4)=0.5g/L,ρ(K2HPO4)=0.5g/L,P(MgSO4·7H2O)=0.2g/L,ρ(NaCl)=0.2g/L,p(CaCl2)=0.1g/L,ρ(NH4NO3)=1.0g/L,MnSO4痕量,FeCl3痕量。 2#基础培养基:p(NaNO3)=2.0g/L,ρ(KH2O4)=0.2g/L,ρ(MgSO4.7H2O)=0.2g/L,ρ(酵母浸膏)=1.0g/L. 含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0.2%的琼脂。1.3 优势菌筛分试验1.3.1 选择富集培养 称取土样各10g,加入到500mL1#含油培养基(含机油4mL)中,调pH值7.0,通气恒温30℃培养48h后,分别移取上述培养液5mL于45mL1#,2#含油培养基(含机油2mL)中,恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离 制作1#,2#固体含油培养基平板苦干,用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线,恒温30℃培养48h后平板划线分离,重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1.4 生长条件正交试验 在保证供氧和氮、磷营养前提下,选择温度。油的质量浓度(以mg/L计)和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验,方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下,5000r/min离心5min,分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体,培养60h后测定样品中油的质量浓度。 5 I) K5 d6 d3 L0 u
表1 ZL1菌株正交试验方案及试验结果 7 B* ~- ^5 I Y S$ e9 Z9 h
" u1 Y# N" k2 L! y: n, U! F& ^; [' E6 T/ ^+ M
, K0 s& F9 M. q7 ^, C, U
2 L5 h) q) {- K" K7 |分组号: N7 p# w7 ^9 {
因素
9 `; H* ]8 J; z! s; P3 O测定结果ρ(油)/(mg.L-1)1 Y4 B. {) b8 ]: e' A( j
降解测量ρ(油)/(mg.L-1)
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ρ(油)/(mg.L-1)
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7.0$ h4 T( {5 o( s+ {& K% f
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4
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7.0
2 \: R% f, a. K0 {220
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2 l8 m) \; q3 Z+ e0 H% U. @8 W4 m8 g
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3 e% J" ]) S2 C1 SK3
+ ~5 I+ O/ k& Q. L) D* B102+ X( j, i, w# v ^
144( u+ H$ u! n& C4 G
165
( y1 S7 O) j. |( l / _! Z" h* o) u( ~0 y; X w2 q0 `1 t
$ Q7 D. c0 Z6 S+ @! N. n# j
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1 Z' k7 S0 D. A2 k) R1 e9 Z128; J, }' g0 T, w9 v8 B
44! f8 l1 V; @4 Z* a- z8 u
14
/ W4 U9 ?. `# Y4 s* ` N8 V5 }
8 B" h7 }1 ~9 L# B ; o: r% P. o7 c
表2 ZL2菌株正交试验方案及试验结果 ; Y/ R5 k4 f: Z! Z+ E, T g
r$ I0 w6 n6 H" L2 r
2 |# d+ P7 ~- j# X3 p
4 u1 m0 y0 F& o+ J8 C4 v) d
' o' J: o( e d. V分组号3 o; P; J' W) A+ y3 P* W) }
因素+ ?4 C; h- o& v# w- H; \8 p. Y
测定结果ρ(油)/(mg.L-1)
C. c' [* V9 ]: \; H降解测量ρ(油)/(mg.L-1)- q- k) I+ _2 u: N. T+ N
. e+ z1 F3 b" W, a1 Q, e* k温度/9 }( a7 }# ?) X( |" K% S6 t0 R
ρ(油)/(mg.L-1)5 }8 o+ t* E1 A) f" ~, m& ^3 y3 q
pH值+ o. U% v# V) ^7 p" P1 J% _+ h
# B& o" S+ { F5 |' h2 e1
I) l: h; M. k9 A& X& v- V25& r" x! i% f* z, j5 g6 X/ l
368
- |) r8 l& v% `, G9 E% C3 ^: j* _6 G9 k4.0# B2 h8 r4 ?4 ~7 W4 R: a# g
69- |% S2 g1 y( e% ^5 g! k
2998 V! I2 m* b# F4 k; j
0 ~6 w; c% ~+ u3 a1 i
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3 A* C' L0 f+ t# B) K* Y6.06 B$ |. ~8 N9 n, m, p) n" t
2676 Q |3 @( s! v) e/ @2 O
307
+ {, D( s+ }/ x) |+ ]/ g
1 H3 x B& y' U. i/ Z3/ U) o1 t9 a0 ]2 A8 P
25
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272- `7 F! S/ ?/ l1 R. t: `& f
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K3- b% K7 b+ _# G, W
226- M) N4 ^) N3 Y( l( t V/ e c
271
: I0 W: o6 }- X& U* e# o: m |: \264' n/ c/ n' }5 o# T2 }; y( u
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3 M. O1 D8 v }! }' _R7 v$ g1 L! O9 H, ?6 c/ }( R2 f) v9 T @
73. H' r v5 H, h2 T; Y
161 [$ Q% q1 e; m4 L& W
25
$ n* h4 W' ?. l% c' ]- |+ M* M " h2 M5 |$ }' S( I" Z& b- P
( G: N0 L# n' z+ i8 p& @) z2 e
1.5 降解能力试验 配制机油质量浓度为270mg/L的含油培养基1L,投入小型间歇反应器中,加入离心分离得到的湿菌体5g,通气恒温30℃培养,间隔12h取样测定其含油量。1.6 测试方法 用紫外介光光度法测定。 * k1 c: \+ O3 K! }3 P1 m
2 结果分析 # z$ v; E( Y4 P: C7 w5 G/ f- p3 Z
2.1 优势菌筛分试验 富集培养过程中,1#土样的培养液出现的泡沫较多,乳化现象明显,菌液也较为粘稠,分离出较多的菌株,说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株,编号为ZL1,ZL2,ZL3,ZL4,性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1(1#培养基)和ZL2(2#培养基)进行正交试验和连续培养试验。 0 Y$ y8 O& Z2 s
表3 4株机油降解菌形态特征 * l5 O0 r0 [& q% [
3 g' I, j {& N
9 e+ ^3 I, c. {) H" D
$ w# \3 ^5 o: G7 _
0 D' a. b0 M5 t8 N* \形态特征8 L8 z& h/ _; v
ZL1
, a" q! l. N$ l' @- M# ]ZL2
! \% F! v l% l' IZL3
% g; D$ c& v5 b# ?4 wZL4
, A8 l$ u9 G7 ]/ B
) R; f5 z( j" W, T菌落颜色
& T2 o7 u* c0 w- s% A粉红
- \0 B' G# M$ `3 f/ I6 O2 R淡黄2 N, f. O. a$ |$ `) i7 N2 A; w f
淡黄7 I% e. U" z$ Q! }
粉红
* k- a# }+ ]9 D+ x/ U, N" N9 }" ]" i4 n7 \( }3 I4 W
菌落形态: j/ R8 o, ^2 S' I: }1 r* q7 ^. m
不透明,微隆起,全缘,) A, y- n9 ^ R/ U- e0 `. v
半透明,圆形
" R# ^# P% U/ e" v; k6 j半透明,圆形,隆起,: q( X2 N3 t- _' U' j
不透明,米粒状突起,
- N5 L7 }. a/ B' s6 \; Q7 z3 w2 H) }" `* f7 c. H7 N9 h
2 Y6 ], M8 ?1 c. p, i光滑,有光泽
W" V) b( }6 ]) x$ B" I光滑,较干燥
: J$ a7 c1 | Z7 k& S$ b3 x光滑,有光泽
3 U) y% X4 ^; a) i' }较湿润
5 `: ~: r* C; v0 X8 u! x4 ^; ~$ u0 `4 O2 U" Y# \- h% _
菌体形态8 L# _3 h, G- h6 r0 i4 U
短杆
! \+ o3 L3 K( @* B球形+ c4 ]4 ^1 i- X
杆状8 C* N; s# V' o/ M# |. A, h% Q
丝状% ?/ F0 K5 z2 E, N) v. D
) b$ h7 N3 h% z; r7 W# ^( o" n! M
菌体大小/μm; I" u, G- D* z& B
(0.3-0.8)×(0.6-1.0)
" ^' y2 X) U) Y' H2 V h6 |* ~- U. hΦ0.3
* D# O0 q. \3 S(0.5-0.8)×(1.3-5.0)
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G
- k# |- m- g) lG2 k3 ]8 o. x! l* Z
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7 L" M" Y- Y5 K8 _# ~) UG, S) r/ L4 R. I
2 P" G/ ~ k F s- t# B, J; U$ r
初步鉴定
( M1 E/ Y# j5 X& B. L+ s黄杆菌属
' ~. m: k* l% \/ u6 E微球菌属7 w$ n( z& U. N6 M" S
假单胞菌属0 V- A3 w7 L: M- l- g- |; u
酵母菌属
; T6 |' U/ n" s( \( v2.2 生长条件正交试验 ZL1,ZL2菌株按设定的正交试验方案进行试验,测定其剩余含油量,以降解油量作为考察指标,计算结果见表2、表3。分析极差值R可以看出:ZL1菌的R温度为128,ZL2菌的R温度为73,均为最大极差值,说明温度是影响降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解机油能力较强;油质量浓度越低降解效果越好;pH值为7时,降解效果最好,说明ZL1菌适于在中性条件下生长。30℃ZL2菌降解机油能力较强;机油的质量浓度在368-767mg/L范围内对降解效果影响不大,以ρ(油)=574mg/L时降解效果最明显,还应进一步扩大试验的油含量范围以确定油含量对ZL2菌降解能力的影响;pH值在4-8范围内对降解效果的影响也不显著,其中PH值为6时降解效果最好,说明ZL2菌较适于在中性偏酸条件下生长。2.3 降解能力试验 向1L油质量浓度为270mg/L培养液中投加5g湿菌体进行间歇培养,考察ZLI,ZLZ菌的降解能力,结果见图1。由含油量与培养时间关系曲线可以看出:ZL1,ZL2菌被加人含油培养基后很快适应环境,随着培养时间的增长,含油量不断下降。ZL1菌在30h左右去除率达到最大,后含油量下降缓慢,到60h左右曲线趋于平直;ZL2菌在20h左右去除率达最大,48h左右曲线趋于平直。曲线说明ZL1,ZL2菌适应能力较强,ZL1菌在0-60h内生长旺盛对机油的去除率可达67.9%,ZL2菌在0-48h内生长旺盛,对机油的去除率高达76.2%,试验后期降解曲线趋于平直,含油量基本不再变化,可能是由于机油中的一些重组分难于降解的原因。
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$ L# |) f& |6 ]4 J I0 z. D3 结论 , L0 O" I7 R+ A8 q
①石油污染土壤较适于做高效石油降解菌驯化菌源。筛选到两株高效机油降解菌ZL1,ZL2。通过正交试验得出ZL1黄杆菌属适于在25℃,油的质量浓度在424mg/L左右,中性条件下生长。ZL2微球菌属适于在 30℃,油的质量浓度在574mg/L左右,中性偏酸条件下生长。 ②温度对ZL1,ZL2菌的机油降解能力影响较大。ZL2菌的PH值、机油浓度适应范围较广,有较好的应用前景。 ③ZL1,ZL2菌对初始机油质量浓度为270mg/L培养液的去除率分别达到67.9%和76.2%,混合菌株的降解效果有待进一步研究。 ( E& ?: R+ F! O- q% g, [
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) {7 j$ g" p. R4 @+ J+ r 作者简介:刘勤亚(1977-),女,河北石家庄人,环境工程专业硕士在读。 H7 H$ q* z! @
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